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MCE主题直播|荧光标记技术详解：引领您深入了解荧光标记技术，助您探索微观世界
讲师：张小千 MCE产品经理
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直播内容
在本次直播中，MCE直播间将详细讲解各种常用标记染料的特性，助您在科研道路上探索无限可能，深入探索荧光标记的世界，引领您领略蛋白/抗体与小分子的璀璨光辉。

1.荧光染料介绍

2.蛋白/抗体荧光标记讲解；

3.小分子荧光标记讲解；

4.常用标记染料解析

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主题讲座
荧光染料 蛋白/抗体荧光标记 小分子荧光标记
微课堂
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直播答疑
Q：

如何避免传统荧光试剂的缺陷，比如光漂白现象？

A：
可以加入抗荧光淬灭剂。
Q：

流式抗体孵育是不是一定要低温?原因呢？时间是不是1小时不宜太长，最短多少？

A：
流抗孵育一般要1h以上，不同的靶点结合会有差异，建议先做预实验。
Q：

标记完的抗体出现非特异性怎么解决？

A：
减少标记时间，室温孵育，换成层析柱纯化
Q：

90-98的回收率是FITC特有的吗 ?

A：
所有的荧光基团都能达到这个回收率，前提是标记是过量的，做到染料能完全结合到蛋白，达到高回收率。且如果用层析柱的话，回收率会很高，但透析袋的回收率可能会下降很多，在80%、85%左右。如果蛋白量很少（10/20/50ug），回收率也会相应下降，这时可选用市面上的一些相应规格的微型透析/层析柱，一般可用于50ug左右的蛋白标记。
Q：

大分子标记在体外做 ，怎么体内示踪 ？

A：
如果是细胞实验，则可以与细胞共孵育，如果蛋白可以进入细胞内，就可以将其导入合适的位置，发生相应反应。 如果是体内成像的话，可以进行腿静脉注射/腹腔注射，看他能到达具体的位点。因为染料和目标蛋白结合后，就不会再和其他的蛋白相结合，所以不用担心出现非特异性定位。
Q：

海藻糖为什么会影响标记？

A：
因为糖类本身就是分子量较大的一个结构，会影响纯蛋白的浓度信号，而且海藻糖本身在溶解过程中会发生一些反应，影响标记效率。 
Q：

荧光标记失败收费吗 ？

A：
如果是大分子标记，一般是不会失败的，若失败则不收费。小分子标记不做活性保证，需根据具体情况判断 ，原料贵时酌情收取成本费，收费情况会提前告知客户。且在正式实验前会进行小试预测结果，若效果不好会与客户进行再沟通。
Q：

AF488平替有什么？

A：
平替有很多。只要是激发波和发射波在488和515周围的都可以看，如VF488,FITC等  
Q：

如何检测蛋白有没有标记上？

A：

（1）看纯化产物，如果和染料颜色一样或者稍淡一些，会默认标记上了。

（2）通过荧光显微镜去看，如果出现带有蛋白形态的荧光池，就是标记上了。

（3）做SDS-PAGE，条带如果往上迁移或往上拖带，即标记成功。

（4）分光光度计测荧光信号值。

（5）做HPLC看下分子量。

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